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DDAH1新转录本经miRNA海绵机制影响DDAH1表达

作者:旷达彬文章来源:所内发布时间:2017-5-16 16:06:04

 近日,我所陈小平课题组在《Nitric Oxide》杂志上发表一篇名为“DDAH1-V3 transcript might act as miR-21 sponge to maintain balance of DDAH1-V1 in cultured HUVECs”的文章。

目的:研究miR-21直接与DDAH1 3'UTR区结合,调控人脐静脉内皮细胞内DDAH1表达水平;探索DDAH1-V2/V3转录本作为miRNA海绵调控DDAH1-V1表达的机制。

方法:构建含miR-21识别位点的DDAH1 3'UTR区的PmirGLO双荧光素酶质粒PmirGLO-miR-21,不同浓度的miR-21模拟(25,50,100nM)物或阴性对照(100 nM)及突变miR-21(mut-miR-21)、miR-21抑制剂分别与PmirGLO-miR-21质粒共转染HUVEC-C 24h,测定荧光素酶活性;使用25nM miR-21模拟物转染HUVEC-C后,使用2ug/ml放线菌素D处理0,2,4,8,16,24h后检测DDAH1 mRNA半衰期;将PmirGLO-miR-21质粒单独或与miR-21模拟物共转染HUVEC-C 24h,测定其对miR-21、DDAH1 mRNA和蛋白的表达。

结果:25、50、100 nM的miR-21 模拟物均剂量依赖的下调报告基因质粒活性(25 nM组,P<0.05; 50 nM和100 nM组,P<0.01),miR-21抑制剂可上调其活性(P<0.05),同时上调DDAH1三个转录本mRNA表达(P<0.05)。miR-21抑制剂对DDAH1-V3的上调程度最高。过表达miR-21可下调DDAH1三个转录本mRNA水平及半衰期(P<0.05)。miR-21转染组和阴性对照组DDAH1-V2的半衰期均较DDAH1-V1,-V3短(P<0.05)。800ng/ml PmirGLO-miR-21可逆转miR-21模拟物对DDAH1蛋白的下调作用(P<0.05)。转染800ng/ml PmirGLO-miR-21可上调HUVEC-C细胞内miR-21水平(P<0.05),同时DDAH1蛋白表达有上升趋势。

结论:MiR-21直接与DDAH1 3'UTR区结合,下调DDAH1的表达,miR-21对DDAH1-V3的抑制作用更为明显。DDAH1-V3转录本3’-UTR区可能经miRNA海绵机制调控细胞内miR-21与DDAH1-V1的结合,进而影响DDAH1蛋白的水平。miR-21-DDAH1的相互作用机制可能为心血管疾病的治疗提供新的线索800ng/ml PmirGLO-miR-21可逆转miR-21模拟物对DDAH1蛋白及eNOS活性的下调作用(P<0.05)。

原文链接:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term= DDAH1-V3+transcript+might+act+as+miR-21+sponge+to+maintain+ balance+of+DDAH1-V1+in+cultured+HUVECs


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